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高效液相色谱仪操作步骤
  • 发布日期:2019-09-04      浏览次数:170
    • 高效液相色谱仪操作步骤: 

      1).过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。

      2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

      3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。

      4).进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。

      5).有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。

      6).调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。

      7).设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。

      8).进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。

      9).关机时,先关计算机,再关液相色谱。

      10).填写登记本,由负责人签字。

      注意事项:

      1).流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

      2).柱子是非常脆弱的,第yi次做的方法,先不要让液体过柱子。

      3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。

      4). 压力不能太大,最hao不要超过2000psi

      1.使用”保护柱”,能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说,”保护柱”即是很短的色谱柱,填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”,可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质。而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当。会造成反效果。因为在保护柱使用过程中。如污染达到一定程度而没有及时更换,累积的杂物很可能会冲入色谱柱中,反而会造成色谱柱损坏。因此。使用”保护柱”时,最重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。

      2。选择高品质的柱子,并注意使用方法;可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同,对品质管理很严格的厂家而言,这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格,即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以,选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子,我们知道,任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用,柱子更易产生变化。因此,应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时,许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变;如此一来,使用旧柱子开发出来的新分析方法,很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子;并且一支柱子最hao使用在一种分析方法上;则柱子寿命可以延长。

      3。定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来,自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。最hao是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时﹐最hao用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用100%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗,而直接用100%有机溶剂冲洗的话,缓冲剂很可能会沉淀出来,而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。专家建议最hao将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地最后,如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前,最hao参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子,使柱子的寿命延长,最hao是使用”保护柱”和定期冲洗柱子

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