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组织病理切片以及HE染色
  • 发布日期:2020-03-13      浏览次数:418
    • 组织病理切片以及HE染色 

      (一)实验原理:苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)能较好地显示组织结构和细胞形态,可用于观察、描述正常和病变组织的形态学,而且HE切片可较长时间保存,被称为常规染色方法。

      (二)实验步骤: 一、制作切片 

      1、取材、固定:取小鼠肾脏组织适当大小,并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 

      2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋 

      组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块,进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。组织脱水后,必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂,通过这种溶剂的媒介作用,使石蜡浸入组织块。在此过程中,因组织块中的水分被溶剂所取代,组织块变得透亮,因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。zui常用的透明剂为二甲苯,处理时间为30min左右。

      组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其他浸透剂(如火棉胶、碳蜡和明胶等)渗入组织内部的过程称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中,常需经过3小时的浸渍,期间需更换3次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。 

      组织块经过浸蜡或浸透,用包埋剂(石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等)包起的过程称包埋,包埋后便制成含组织的块。这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度,有利于切成薄片。石蜡包埋是病理日常工作中zui常用的包埋方法。用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。但在有些情况下,如某些酶染色时,则需采用低温石蜡包埋,以保存组织内酶的活性。 3、切片、制片 

      石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机,以前者为多用。切片厚度一般为3-5μm。切片时先将组织片平摊于一块玻璃上,迅速滴加30%的酒精水溶液使组织片完全展开,再移入40℃恒温热水器中。也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中,待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上,经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。 

      二、HE染色

      1. 二甲苯脱蜡2×10 min; 

      2。 无水乙醇洗去二甲苯2×5min; 

      3。 95%、80%乙醇各l0 min,自来水洗l min(不要让急水直接冲至载玻片上的组织),蒸馏水洗1min; 

      4。 苏木素染色4 min,自来水洗2 min; 

      5。 1%盐酸酒精分化20 s(镜下控制),自来水洗2 min; 

      6. 1%稀氨水返蓝30s(镜下控制),自来水洗2分钟,蒸馏水洗1min; 

      7. 伊红染色90s; 

      8. 80%乙醇脱水10s,95%酒精10s,无水乙醇5min; 

      9. 无水乙醇10min; 

      10.二甲苯2×10 min; 

      11.中性树胶或加拿大树胶封片。 

      (三)实验结果:细胞核呈蓝色;细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。 

      (四)实验分析:HE染色时病理学中常用的一种诊断方法,通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变化,从而做出病理学诊断。 

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